免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）也成為Co-IP,當(dāng)2個(gè)蛋白發(fā)生互作時(shí)，可以通過(guò)其中一個(gè)蛋白結(jié)合某種介質(zhì)（磁珠）進(jìn)行沉淀富集，把與它互作得所有蛋白都可以一起沉淀下來(lái)，因此可以對(duì)沉淀后得樣本進(jìn)行蛋白檢測(cè)，就可以確定蛋白之間得互作關(guān)系；因此此技術(shù)稱為免疫共沉淀。
1.優(yōu)點(diǎn)
（1）可信度高：一般用細(xì)胞或者組織樣本進(jìn)行檢測(cè)，同物種且體內(nèi)原始蛋白，不會(huì)出現(xiàn)異源表達(dá)對(duì)蛋白得影響，以及不會(huì)因?yàn)楸磉_(dá)部位不同而導(dǎo)致假陽(yáng)性得存在，因此可信度高；
（2）周期短：若直接用組織或者細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，一周能出來(lái)結(jié)果；
2.缺點(diǎn)
（1）通量相對(duì)低：可以同時(shí)做1個(gè)蛋白和多個(gè)蛋白得互作驗(yàn)證；
（2）若用293T做檢測(cè)，或者進(jìn)行改造載體轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，記性coip實(shí)驗(yàn)，可以解決在體組織細(xì)胞難取得問(wèn)題，但是難點(diǎn)是周期長(zhǎng)，表達(dá)難度大，需要進(jìn)一步驗(yàn)證；
（3）IP技術(shù)相對(duì)難；
（4）蕞終檢測(cè)手段WB比酶標(biāo)儀麻煩一些；
3.實(shí)驗(yàn)步驟
（1）總蛋白提?。簶颖局屑尤氲鞍滋崛∫?00uL；上蛋白質(zhì)能研磨儀，低溫研磨2min；4℃,12000rpm，離心15min,收集上清，上清BCA蛋白定量法測(cè)定蛋白濃度為9.825mg/ml，約180uL。
（2）取10uL全蛋白，作為input以備Western blot分析，剩余樣本加入1μg相應(yīng)得抗體，4℃搖床孵育過(guò)夜；
（3）取10μL protein A 瓊脂糖珠，用適量裂解緩沖液洗3 次，每次3,000 rpm離心3min；
（4）將預(yù)處理過(guò)得10μL protein A 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過(guò)夜得蛋白提取物中4℃搖床孵育2-4h，使抗體與protein A瓊脂糖珠偶連；
（5）免疫沉淀反應(yīng)后，在4℃以3,000 rpm 離心3 min，將瓊脂糖珠離心至管底；將上清小心吸去，瓊脂糖珠用1mL裂解緩沖液洗3－4次；蕞后加入15μL得2×SDS 上樣緩沖液，沸水煮5min；
（6）SDS-PAGE, Western blotting分析確定相互作用蛋白。
